孕激素受体亚型在子宫内膜异位症中的表达及意义

　　作者：奚庆华，张玉泉，徐云钊，叶 青 作者单位：南通大学附属医院妇产科，南通226001

　　【摘要】 目的：研究孕激素受体(PR-A+B)和孕激素受体亚型(PR-B)mRNA在子宫内膜异位症异位内膜和在位内膜中的表达及意义。方法：分别选取子宫内膜异位症患者异位内膜组织40例、在位内膜组织18例和对照组正常内膜组织20例作为研究对象，应用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测PR-A+B mRNA,PR-B mRNA的表达。结果：PR-A+B mRNA在异位内膜的表达强度0.09±0.02明显低于在位内膜的0.81±0.16和正常内膜的0.83±0.11(P﹤0.01);PR-B mRNA在异位内膜的表达强度0.04±0.01明显低于在位内膜的0.64±0.16和正常子宫内膜的0.63±0.09(P﹤0.01)。结论：子宫内膜异位症患者异位内膜组织中PR-A+B mRNA,PR-B mRNA的表达降低可能与子宫内膜异位症的发生发展有关。

　　【关键词】 子宫内膜异位症;孕激素;受体

　　Expression and significance of progesterone receptor isoforms in endometriosis

　　XI Qinghua, ZHANG Yuquan, XU Yunzhao, et al (Affiliated Hospital of Nantong University,Nantong 226001)

　　[Abstract] Objective：To investigate the expression of progesterone receptor isoforms in the eutopic and ectopic endometrium from women of endometriosis. Methods: Forty women with endometriosis were selected as study group. 40 ectopic endometrium,and 18 matched eutopic endometrium were collected from them simultaneously at the time of surgery.20 normal endometrium were obtained as control group.The mRNA expression of progesterone receptor isoforms was detected by Reverse transcript polymerase chain reaction. Results：The density of PR-A+B mRNA expression in ectopic endometrium(0.09±0.02) from endometriosis patients was significantly fewer, compared with that in eutopic endometrium(0.81±0.16) and normal endometrium(0.83±0.11) without endometriosis(P﹤0.01). The density of PR-B mRNA expression in ectopic endometrium(0.04±0.01) from endometriosis patients was significantly fewer, compared with that in eutopic endometrium(0.64±0.16) and normal endometrium(0.63±0.09) without endometriosis(P﹤0.01). Conclusion:The low expression of PR-A+B mRNA and PR-B mRNA of

　　ectopic endometrium might contribute to the development of endometriosis.

　　[Key words] Endometriosis;Progesterone;Receptor

　　子宫内膜异位症是雌激素依赖的疾病,但一些研究发现患者的雌激素水平并无显著改变而表现为异位灶局部雌激素合成增加而灭活减少的特性。孕激素通过孕激素受体调节17β羟类固醇脱氢酶灭活雌二醇的作用， PR异常可间接影响雌激素的代谢，PR分为两种受体亚型PR-A、PR-B，本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测子宫内膜异位症患者异位内膜和在位内膜及正常子宫内膜组织中孕激素受体PR-A+B mRNA及亚型的基因表达(PR-B mRNA)，探讨孕激素受体亚型在子宫内膜异位症发病中的作用。

　　1 对象和方法

　　1.1 临床资料 收集2006年4月～2007年4月子宫内膜异位症患者40例，年龄23～45岁。按1996年美国生育学会修订的子宫内膜异位症分期法(r-AFS)进行分期，Ⅰ~Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期4例，18例在位内膜取自上述因该病子宫切除的患者;并取20例同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者的正常内膜作对照，年龄40～48岁，平均45岁。所有患者术前3个月内均未接受激素治疗，术后均经病理学诊断证实。

　　1.2 研究方法 新鲜组织标本，无菌取材，生理盐水冲洗，放入灭菌管置液氮内冷却，后放入-70 ℃冰箱存放，标本均用一步法提取总RNA。试剂盒由上海生工生物工程技术公司提供，取5 μg组织总RNA合成cDNA，取1/5的cDNA加5UTaq聚合酶及相应缓冲剂，引物为25 pmol，50 μl体系，94 ℃ 5 min，循环条件为94 ℃ 60 s，57 ℃ 50 s，72 ℃ 60 s，共33个循环，最后72 ℃延伸10 min。PCR产物经20 g/L琼脂电泳，紫外线扫描分析结果。由于PR-A、PR-B由同一基因编码，区别在于PR-B的末端较PR-A多164个氨基酸，PR-A没有自己独特的基因序列根据两者共同序列设计引物。PCR引物为，PR-A+B(up 5′-TGGAAGAAATGACTGCATCG-3′;down 5′-TAGGGCTTGGCTTTCATTTG-3′);根据PR-B特有序列设计引物，即(up 5′-ACACCTTGCCTGAAGTTTCG-3′;down 5′-CTGTCCTTTTCTGGGGG-ACT-3′)两者扩增片段长度为196 bp。内参照引物为up 5′ -AGCGAGCATCCCCCAAAGTT-3′; down 5′-GGGCACGAAGGCTCATCATT-3′) 扩增片段长度为285 bp。

　　1.3 统计学方法 用SPSS10.00软件进行分析，组间PR-A+B和PR-B mRNA的其半定量结果比较采用方差分析和t检验，P<0.05示差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　PR-A+B和PR-B mRNA的表达见表1。研究组在位内膜PR-A+B mRNA和PR-B mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PR-B mRNA扩增分析见图1。

　　3 讨 论

　　异位内膜的生长依赖局部的高雌激素活性，17β羟类固醇脱氢酶灭活雌二醇的作用受孕激素受体的调节，研究发现孕激素通过孕激素受体作用于正常子宫内膜间质细胞产生旁分泌因子，诱导邻近的上皮细胞产生17β羟类固醇脱氢酶。异位内膜由于孕激素受体异常和间质细胞缺陷，不能诱导邻近的上皮细胞产生17β羟类固醇脱氢酶，导致局部的雌激素水平增高。子宫内膜异位症裸鼠模型的研究显示异位灶中孕激素抵抗可能与其缺乏完整，有功能的PR在异位灶中具有消除雌激素依赖性或非依赖性增殖的作用，一旦其缺失则孕激素抵抗雌激素增殖的能力下降，子宫内膜异位症的发生率上升[1]。PR是一种结构复杂的蛋白质，至少存在两种不同的亚型(A和B),它由多个结构功能域组成。

　　本研究结果显示，异位内膜组织PR-A+B mRNA的表达(0.09±0.02)显著低于在位内膜组织(0.81±0.16)中PR-A+B mRNA的表达(P﹤0.01);异位内膜组织PR-B mRNA的表达(0.04±0.01)显著低于在位内膜组织(0.64±0.16)中PR-B mRNA的表达(P﹤0.01)。异位内膜中PR-A+B mRNA的减少以PR-B mRNA减少为主，导致孕激素抵抗雌激素的能力降低，表明异位内膜不同于在位内膜，提示异位内膜和在位内膜之间的差异可能与子宫内膜异位症的发病机制有关，PR-B mRNA的持续低表达使其本身抑制雌激素受体活性和子宫内膜增殖的作用难以体现，在一定程度上可能是其对激素治疗反应较差的原因。至于如何通过受体亚型的竞争筛选更有效的类固醇药物来治疗子宫内膜异位症尚需进一步的研究。

　　【参考文献】

　　[1] Fang Z,Yang S,Lydon JP,et al.Intact progesterone receptors are essential to counteract the proliferitive effect of estradiol in a genetically engineered mouse model of endometriosis [J]. Fertil Steril,2004,82(3):673-678.