老年原发性卵巢癌p16和p15蛋白的表达及其临床意义

　　作者：刘冬满 张志勇 郑寰宇 赵秀芝 陈文妹 作者单位：河北医科大学附属医院唐山工人医院妇产科，河北 唐山 063000

　　【摘要】目的 探讨卵巢原发性癌中p16和p15的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化法检测卵巢黏液性乳头状腺癌30例、浆液性乳头状腺癌40例、子宫内膜样腺癌15例、交界性肿瘤40例、良性肿瘤40例。结果 p16在卵巢癌的表达率为32.9%，明显低于交界性肿瘤82.5%、良性肿瘤62.5%(P<0.01)，p15蛋白在卵巢癌的表达率为41.1%低于交界性肿瘤52.5%、良性肿瘤75.0% (P<0.05)，其表达强度与临床分期、淋巴结转移、雌激素水平有显著相关性,淋巴结转移者、临床分期越高、雌激素水平越高，p16、p15阳性表达率越低(P<0.05)。结论 p16、p15的低表达在卵巢原发性癌的发生、发展中起一定作用。

　　【关键词】 卵巢肿瘤;p15;p16;免疫组织化学

　　卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一。但其组织来源和分类复杂,病理形态与生物学行为有时不一致,因此在临床病理诊断及预后判断上存在一定难度。研究表明p16、p15的缺失或突变的过表达与肿瘤的形成与预后关系密切〔1〕。本研究应用免疫组化法对原发性卵巢癌中p16、p15蛋白的表达进行观察,探讨它们在原发性卵巢癌发生发展过程中的作用,判断其在原发性卵巢癌的病理分级、预后判断和临床治疗的实用价值。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料

　　收集2004～2008年唐山工人医院病理科存档蜡块，其中原发性卵巢腺癌(C组)85例(浆液性乳头状腺癌40例、黏液性乳头状腺癌30例、子宫内膜样腺癌15例)，年龄50～75岁,平均62.6岁。交界性卵巢肿瘤40例(B组，交界性浆液性囊腺瘤25例、交界性黏液性囊腺瘤15例)，良性卵巢肿瘤40例(A组，浆液性囊腺瘤20例、黏液性囊腺瘤20例)进行研究。

　　1.2 试剂及方法

　　p16、p15单克隆抗体及二步法试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。组织切片厚度为4 μm,常规脱蜡至水。免疫组化染色采用二步法,操作方法按试剂盒说明进行,DAB染色,苏木素复染。用已知p16、 p15阳性片作阳性对照,PBS代替一抗作空白对照。

　　1.3 临床分期及病理分级

　　手术病理分期按FIGO标准,Ⅰ期15例,Ⅱ期35例,Ⅲ期20例,Ⅳ期15例。病理分级按2004年WHO分级标准,Ⅰ级17例,Ⅱ级35例,Ⅲ级33例。

　　1.4 结果判断标准

　　细胞浆或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞,阳性细胞数≥10%为阳性,无阳性细胞或阳性细胞数<10%为阴性。

　　1.5 统计学方法

　　采用SPSS13.0统计学软件进行χ2检验及四格表确切概率法。

　　2 结 果

　　2.1 p16、p15蛋白在卵巢原发性癌、交界性肿瘤及良性肿瘤中的表达情况

　　p16在卵巢癌的表达率为32.9%明显低于交界性肿瘤82.5%、良性肿瘤62.50%(P<0.01)，p15蛋白在卵巢癌的表达率为41.1%低于交界性肿瘤52.5%、良性肿瘤75.0%(P<0.05)(见表1)。表1 原发性卵巢癌中p16、p15蛋白的表达(略)

　　2.2 p16、p15蛋白表达与卵巢癌临床分期的关系

　　p16、p15蛋白在Ⅲ、Ⅳ期的阳性表达率明显低于Ⅰ、Ⅱ期，有淋巴结转移组的阳性表达率明显低于无淋巴结转移组，雌激素水平高组的阳性表达率明显低于雌激素水平低组(均P<0.05)。而p16、p15蛋白的表达与年龄、病理分级无关(P>0.05)，见表2。表2 p16、p15的表达与原发性卵巢癌临床病理特征之间的关系〔n(略)〕

　　3 讨 论

　　肿瘤的发生是一个多因素多步骤的慢性病理过程。近年来，研究表明细胞周期的失控是导致肿瘤发生的重要原因。而细胞增殖的关键是G1期的启动。G1期的启动除受周期素(Cyclin)和周期素依赖性激酶(Cyclindependentknases,CDK)的正向控制外,还受到一些细胞周期调控相关基因的制约。如果这种负向调控作用丧失,细胞就会生长失控、转化,导致肿瘤的发生〔2〕。

　　p16(multiple tumor supressor I,MTSI)位于人类染色体9p21,有3个外显子和2个内含子,全长8.5 kb,编码为148个氨基酸组成的蛋白质。p16在正常情况下与细胞周期素D1(CyclinD1)竞争性结合CDK4，抑制由CDK4介导的抑癌基因Rb产物磷酸化,使Rb蛋白处于非磷酸化的活性状态,阻止细胞周期由G1期进入S期，抑制细胞增殖，防止细胞周期失控变成无限制扩增、分裂、生长，从而达到抑癌作用。p16失活与多种肿瘤的发生、发展密切相关〔3〕。Milde〔4〕等分析发现94例原发性卵巢癌中19例存在p16基因的缺失(主要为黏液性及内膜样癌),认为p16失活是卵巢癌某些亚型的典型征象。Ichidawa〔5〕等发现在49例原发性卵巢癌中p16失活在Ⅲ期为7/29明显高于Ⅰ～Ⅱ期(0/14),提示p16失活可能和卵巢癌恶性度有关。但Rodabaugh〔6〕等未发现p16基因的缺失或突变,认为p16基因异常在卵巢癌的发生过程中并不重要。

　　p15定位于9p21,全部编码序列长约460kb,编码蛋白质含137个氨基酸，有两个外显子E1和E2，是迄今发现的最直接抑制细胞周期的多种肿瘤抑癌基因。p15通过作用于CDK与CyclinD复合物,特异性抑制CDK4、CDK6激酶活性,阻止Rb蛋白磷酸化,限制细胞从G1期进入S期,从而抑制细胞增殖〔4〕。已有研究表明人类许多原发性肿瘤如白血病、神经胶质癌、肺癌、骨肉癌中都有p15基因及其产物的改变〔7，8〕。p15基因的改变主要包括过度甲基化和高频纯合缺失〔7〕。Okamoto等〔7〕研究发现部分非小细胞肺癌细胞株中p15基因出现纯合子缺失。Gonzalez等在急性髓性淋巴细胞白血病和恶性神经胶质母细胞瘤的原发性肿瘤及其培养细胞株中均发现了p15基因的过度甲基化。Goretzki等〔9〕发现甲状腺癌的淋巴结转移与p15基因改变有关。

　　本研究结果表明,p16、p15在卵巢癌中的表达率明显低于交界性肿瘤、良性肿瘤中的表达,差异有显著性。p16、p15表达与临床分期、淋巴结转移及雌激素水平有关。临床分期越高、组织分化越差、淋巴结可见转移及雌激素水平越高，其表达越弱。提示p16、p15缺失或突变导致p16、p15蛋白的表达降低,使p16、p15抑癌功能丧失,造成细胞异常增殖,从而对卵巢癌的发生、发展起一定作用，p16、p15可以作为老年性卵巢癌生物学行为的评估指标，对临床的治疗起一定的指导作用。

　　【参考文献】

　　1 Kamb A,Gruis A,WeaverFeldhaus J,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types〔J〕.Science,1994;264(5157):43640.

　　2 Peter M，Herskowitz I.Joining the complex：cyclindependent kinase inhibitory proteins and the cell cycle〔J〕.Cell,1994;79:181.

　　3 陆哲明,张 波.p16抑癌基因的发现与研究〔J〕.国外医学·肿瘤学分册，1995;22(6)：3213.

　　4 Takeuchi S，Bartram CR，Seriu T,et al.Analysis of a family of cyclindependent kinase inhibitors：p15/MTS2/INK4B，p16/MTS1/INK4A，and p18 genes in acute lymphoblastic leukemia of childhood〔J〕.Blood,1995;86(2):75560.

　　5 Ichidawa Y，Yoshidas US，Koyama Y,et al.Inactivation of p16/CDK2 and clinical stages of primary ovarian tumors〔J〕.Int J Cancer,1996;69(6):46670.

　　6 Rodabaugh KJ，Biggs RB，Quresh JA,et al.Detailed deletion mapping of chromosome 9p and p16 gene alterations in human bordline and invasive epithelial ovarian tumors〔J〕.Oncogene，1995;11 (7)：124954.

　　7 Okamoto A，Hussain SP，Hagiware K,et al.Mutations in the p16/ INK4A/ MTS1/ CDKN2，p15/ INK4B/MTS2 and p18 genes in primary and metastatic lung cancer〔J〕.Cancer Res，1995;55 (7):144851.

　　8 Teofili L，Martile M，Luongo M,et al.Hypermethylation of CpG islands in the promoter region of p15 INK4b in acute promyelocytic leukemia represses p15 INK4b expression and correlates with poor prognosis〔J〕.Leukemia，2003;17(5):91924.

　　9 周静萍,托德韬.口腔鳞状细胞癌发生发展过程中p15的表达〔J〕.皖南医学院学报，2003;22(2)：702.