表皮生长因子受体表达与预测葡萄胎恶变相关性研究

　　作者：谢玲 作者单位：青海省妇女儿童医院妇产科 )

　　【摘要】 目的 研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在妊娠滋养细胞疾病中的表达，探讨EGFR对预测葡萄胎恶变的价值。方法 采用免疫组化方法，检测石蜡包埋的105例妊娠滋养细胞肿瘤组织和20例正常早孕绒毛组织EGFR蛋白表达水平。结果 在合体滋养层，妊娠滋养细胞肿瘤组织和正常早孕绒毛组织均强表达EGFR蛋白;在细胞滋养层，正常早孕绒毛、非恶变组葡萄胎的EGFR蛋白表达高于恶变组葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达(P <0.05, P <0.05, P<0.05);而恶变组的EGFR蛋白表达强于侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达(P <0.05, P<0.05);EGFR蛋白表达在侵蚀性葡萄胎和绒癌之间差异无显著性(P>0.05)。结论 EGFR表达降低在妊娠滋养细胞疾病发生发展过程中起重要作用，并有可能成为预测葡萄胎恶变的一项新的指标。 谢玲(1973～)，女，汉族，安徽籍，主治医师

　　【关键词】 葡萄胎 妊娠滋养层肿瘤 表皮生长因子受体 免疫组织化学

　　INVESTIGATION INTO THE RELATIONSHIP BETWEENTHE EXPRESSION OF EPIDERMAL GROWTH FACTORRECEPTOR AND GESTATIONAL TROPHOBLASTIC DISEASE.Xie Ling　(Department of Gynecology ， Women and Children Hospital)Abstract Objective To investigate the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) in gestational trophoblastic disease (GTD) and its value in the prognosis of hydatidiformmole.　Methods　105 cases of GTD tissues and 20 cases of normal chorion villi specimens were examined by immunohistochemical techniques using EGFR monoclonal antibody.　Results　Stain for EGFR was detected in all cell types of trophoblasts in GTD tissues and normal chorion villi. In syncytiotrophoblasts (ST)，expression of EGFR protein were strong in GTD tissues and normal chorion villi，and there was no significant differences observed among them.In cytotrophoblasts (CT)，expression of EGFR protein was significantly higher in normal chorion villi and non-malignant transforming groups (NMTG) as compared to those in malignant transforming groups (MTG)，invasive hydatidiformmole and choriocarcinoma (P<0.05， P<0.05，and P<0.05，respectively).Furthermore，expression of EGFR protein was significantly higher in MTG as compared with that of invasive hydatidiform mole and choriocarcinoma groups(P<0.05, and P<0.05, respectively).There was no significant difference in EGFR protein expression between invasive hydatidiform mole and choriocarcinoma groups(P>0.05).Size of the uterus and presence of the lutein cysts were closely associated with hydatidiformmole malignant transformation.　Conclusion　Decreased expression of EGFR may play a vital role in pathogenesis of GTD and the detection of EGFR may provide a new way in predicting malignant transformation of hydatidiform mole.

　　Key words Hydatidiform mole Gestational trophoblastic tumor EGFR Immunohistochemistry

　　葡萄胎是胚胎外层的滋养细胞发生变性、绒毛水肿而形成的泡状物，具有生长活跃及潜在恶变的特点，其中约10%～20%将发展为侵蚀性葡萄胎或绒癌。目前滋养细胞疾病虽在治疗上已取得较为满意的效果，但其发病机理、恶变相关因素、预后评估等仍未明了。本研究采用免疫组化S-P法对105例妊娠滋养细胞肿瘤组织和20例正常早孕绒毛组织的EGFR表达进行检测，同时对葡萄胎的临床因素与葡萄胎恶变的相关性进行研究，寻找早期预测葡萄胎恶变的新指标。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　收集2000年7月～2007年4月间因葡萄胎收住我院行首次清宫的患者标本65例，其中35例为清宫后又因发展为侵蚀性葡萄胎或绒毛膜癌到我院化疗的恶变者(以下称恶变组)，年龄19～50岁，平均32±8岁;30例为随访2年未恶变者(下称非恶变组)，年龄21～47岁，平均29±7岁;因侵蚀性葡萄胎或绒毛膜癌而手术切除的子宫标本各20例，年龄28～56岁，平均40±9岁;全部病例均参照宋鸿钊法诊断[1]。选取2008年4月在门诊行人工流产的健康妇女早孕绒毛组织20例作为对照组，年龄20～43岁，平均28±9岁。

　　1.2 方法

　　检测采用免疫组织化学染色S-P法，鼠抗人EGFR单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司，操作方法按试剂盒说明进行。DAB染色，苏木素复染。用EGFR阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.3 结果判断方法

　　以细胞膜或细胞浆内出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞。采用双盲法对每张切片在高倍镜(10×40)下计数10个视野，每个视野计数100个细胞，计阳性细胞数。对染色强度进行计分(0分为无着色;1分为浅褐色;2分为棕褐色;3分为深棕褐色)，同时对阳性细胞百分率进行计分(0分为无阳性细胞;1分为1%～25%;2分为26%～49%;3分为>50%)，两者相加为EGFR免疫组化计分，0分示为(-)，2分为(+)，3～4分为(++)，5～6分为(+++)。

　　1.4 统计学处理方法

　　实验数据用SPSS 10.0软件包处理，显著性检验采用方差分析和卡方检验，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 EGFR免疫组化定位

　　EGFR阳性颗粒在合体滋养层细胞和细胞滋养层细胞均有表达，主要定位于细胞膜,亦可在部分胞浆中表达,间质细胞不表达。

　　2.2 EGFR免疫组化半定量分析(见表1)表1EGFR蛋白在正常早孕绒毛和妊娠滋养细胞疾病的表达 注：★与恶变组葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌比较， P<0.05;▲与侵蚀性葡萄胎、绒癌比较，P<0.05.

　　表1显示，EGFR蛋白在正常早孕绒毛、非恶变组葡萄胎、恶变组葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌的合体滋养层均呈强表达，其间EGFR蛋白的阳性表达差异无显著性(P>0.05)，但正常早孕绒毛、非恶变组葡萄胎的免疫组化计分高于恶变组葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒癌组(P<0.05)。而在细胞滋养层，正常早孕绒毛EGFR蛋白的表达与非恶变组葡萄胎差异无显著性(P>0.05)，但高于恶变组葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达(P <0.05);恶变组葡萄胎的表达弱于非恶变组(P <0.05)，但高于侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达(P<0.05);侵蚀性葡萄胎和绒癌之间表达无差异。

　　2.3 葡萄胎临床因素与恶变的关系(见表2)表1葡萄胎恶变与临床指标的关系表2显示，子宫增大大于孕龄者较小于孕龄者易发生恶变，其间有显著性差异(P<0.01);有卵巢黄素化囊肿者较无黄素化囊肿者易发生恶变，其间比较有显著性差异(P<0.05)。而不同年龄、孕次、停经时间、血型及滋养细胞增生程度之间差异无显著性(P>0.05)。

　　3 讨论

　　EGFR是原癌基因c-erbB-1(也称HER-1或erbB-1)的表达产物。EGFR通过与配体结合使酪氨酸蛋白激酶激活以及自身的自动磷酸化在细胞信息传递过程中起很重要的作用。在肿瘤与EGFR的相关性研究中发现，部分肿瘤发生了EGFR的过度表达、基因扩增及基因重组[2]。近年来，应用体外细胞培养和动物实验模型对比研究，证实EGFR可通过旁分泌途径、自分泌环路以及影响其配体的表达等机制而促进肿瘤细胞增殖[3，4]。

　　正常妊娠的维持是胚胎与母体之间极其复杂的相互协同过程，正常早孕绒毛滋养层细胞有类似恶性肿瘤的特点。本实验结果提示，EGFR蛋白在合体滋养层和细胞滋养层中均有表达。早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌的合体滋养层全部强表达EGFR蛋白，它们之间没有统计学差异。在细胞滋养层中，随着GTD恶性程度的增加，EGFR蛋白的表达量及表达率均下降;葡萄胎的细胞滋养层EGFR蛋白的表达在葡萄胎首次清宫甚至尚未诊断恶变时，恶变组和非恶变组的葡萄胎已经存在差异，这说明细胞滋养层EGFR蛋白表达降低是葡萄胎恶变的早期事件，并且在GTD恶性进展过程中起重要作用。Ino等[5]在对滋养细胞疾病的中性肽链内切酶(neutral endopeptidase ，NEP)的研究中也发现，细胞滋养层细胞生物特性改变与葡萄胎恶变的关系更加密切。许多研究表明，EGFR过度表达与肿瘤的恶性程度呈正相关，而本研究结果显示，在滋养细胞的恶性转化中，EGFR的表达反而降低，Ladines等[6]的研究结果也发现EGFR在恶性GTD的表达较良性者减弱，推测可能的机制为[7]：(1)正常滋养细胞需要较多量EGFR促进其适当的增殖分化，一旦恶变转化发生，细胞将会失去其正常的调节机制，包括产生EGFR; (2) erbB2与EGFR高度同源，通过旁分泌途径使得EGFR模拟转化细胞的特性，使细胞恶变;(3)恶性滋养细胞中，由于EGF或TGFa与EGFR结合，导致EGFR内源性降解，使EGFR降调至低水平。

　　在对葡萄胎恶变与临床特征的分析中发现，子宫增大大于相应妊娠月份或合并卵巢黄素化囊肿的葡萄胎恶变危险性高，而与患者年龄、妊娠次数、清宫前停经时间、ABO血型及滋养层增生程度没有显著相关性。推测可能的原因是：子宫增长迅速或存在卵巢黄素化囊肿的患者，其血中绒毛膜促性腺激素值往往很高，预示此类患者滋养叶细胞增生十分活跃，故容易发生恶变。因此在临床上对存在以上高危因素的患者应严密随访，加强管理。

　　综上所述，EGFR表达降低可以促进GTD的恶性进展，EGFR蛋白水平的改变先于病理形态的改变，在葡萄胎恶变的监测中具有更高的敏感性，EGFR可以作为早期诊断葡萄胎恶变的指标。

　　【参考文献】

　　1]宋鸿钊.滋养细胞肿瘤的诊断和治疗[M].北京：人民卫生出版社，2004.18-21

　　[2] Tuncer ZS，Vegh GL，Fulop V，et al.Expression of epidenmal growth factor receptor-related family，products in gestational trophoblastic diseases and normal placenta and its relationship with development of postmolar tumor[J].Gynecol Oncol，2000，77(3)：389

　　[3] Fulop V，Vegh G，Doszpod J.The c-erbB related oncoproteins in normal placenta and in gestational trophoblastic diseases (in vitro study)[J].Orv Hetil，2001，142(22)：1147-1154

　　[4] Doraiswamy V，Parrott J A，Skinner MK.Expression and action of transforming growth factor alpha in normal ovarian surface epithelium and ovarian cancer[J].Biol Reprod，2000，63(3)：789-796

　　[5] Ino K，Suzaki T，Uehara C，et al.The expression and localization of neutral endopeptidase 24.11/CD10 in human gestational trophoblastic disease[J].Lab Invest，2000，80(11)：1729

　　[6] Ladines-Llave C A，Maruo T，Manalo AM，et al.Decreased expression of epidermal growth factor and its receptor in the malignant transformation of trophoblasts[J].Cancer，2003，71(12)：4118-4123

　　[7]王新宇，石一复.妊娠滋养细胞疾病表皮生长因子受体表达的研究[J].癌症，2002，18(2)：218-219