淋巴细胞注射治疗习惯性流产的分析

　　作者：温泰芳,李晓红,杨乙，陈静 作者单位：深圳市龙岗区妇幼保健院生殖健康科，广东 深圳 518172

　　【摘要】目的：探讨淋巴细胞注射及护理技术在治疗习惯性流产中的作用。方法：选择年龄24～40岁、原因不明性习惯性流产、封闭抗体阴性患者26例为试验组，选择同期就诊、年龄相当、原因不明性习惯性流产、封闭抗体阴性患者24例为对照组。对试验组进行淋巴细胞注射、心理治疗等护理技术及常规保胎治疗，对照组使用常规保胎治疗。结果：试验组妊娠成功率为73%，对照组为21%，差异有显著性(P<0.05)。结论：淋巴细胞注射及护理技术的应用在治疗原因不明性习惯性流产中疗效确切,具有操作有效、无不良反应等特点。

　　【关键词】 流产 习惯性 抗体 淋巴细胞 免疫疗法

　　Effect of Iymphocyte injection on habitual abortion

　　WEN Taifang， LI Xiaohong， YANG Yi， et al.

　　Department of Reproductive Health， Woman and Children Health Care Hospital of Longgang District Shenzhen 518172, China

　　[ABSTRACT] Objective: To investigate the effects of injection of lymphocyte and the nursing technology in the treatment of habitual abortion. Methods: 50 cases of 24～40 years old women with unknown habitual abortion and negative blocking antibodies were selected and divided randomly into trial group(n=26)and control group(n=24). Besides the treatment of routine tocolysis，the injection of lymphocyte and the psychological nursing were used for trial group，but only routine tocolysis for the control group. Results: The achievement rates of pregnancy were 73% and 21% respectively in trial group and control group(P<0.05). Conclusion: The application of lymphocyte injection with nursing technology is effective for women with unknown origin habitual abortion.

　　[KEY WORDS] Abortion， habitual; Antibody; Lymphocyte; Immunotherapy

　　原因不明的反复自然性流产占习惯性流产(UHA)的50%～70%。在不明原因的反复自然流产中，夫妻双方免疫因素造成的封闭抗体(APCA)缺乏是其主要原因[1]。对免疫性习惯性流产患者，采用丈夫或他人的淋巴细胞进行同种致敏治疗，观察淋巴细胞免疫治疗原因不明性反复自然流产的效果，强化妊娠的免疫学维持机制，抑制母胎间的细胞性免疫排斥反应，探讨封闭抗体对治疗结局的意义，达到减少流产率的目的[2]。

　　护理技术在淋巴细胞注射治疗过程中起着重要的作用。如血液标本的采集、淋巴细胞的分离及探索如何科学合理地进行淋巴细胞分点皮内注射、免疫治疗后皮肤局部反应、妊娠前、后的心理护理是决定习惯性流产妇女能否成功妊娠的关键。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　2005年10月～2008年2月就诊，月经规律、血沉正常，抗核抗体及抗红细胞凝集抗体阴性，无染色体异常，无解剖、内分泌、感染等病因、封闭抗体阴性的原因不明性习惯性流产患者26例为试验组，年龄24～40岁;选择同期就诊、年龄相当、原因不明性习惯性流产、封闭抗体阴性患者24例为对照组。平均(30.82±7.39)岁。流产次数2～13次,平均(3.93±2.97)次,均为3个月以内的早期流产。对其中26例患者进行淋巴细胞注射、心理治疗，辅以常规保胎药物;未行主动免疫治疗的患者再次妊娠后仅以常规保胎药物治疗。

　　1.2 方法

　　1.2.1 了解患者一般情况

　　详细询问患者现病史、过去史、月经史、生育史、家族史及配偶的一般情况。

　　1.2.2 常规检查

　　行妇科、夫妻染色体、盆腔B超、宫腔镜检查，必要时行腹腔镜检查;记录基础体温，行诊断性刮宫;宫颈黏液检查(包括淋病奈塞氏菌、支原体、衣原体)，阴道细胞涂片，性激素6项(黄体生成素、促卵泡激素、雌二醇、孕酮、泌乳素、睾酮)及三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素测定等，排除原因明确的习惯性流产。男、女双方血乙肝、丙肝、梅毒、抗HIV检测阴性。均在实施治疗前行APCA(抗父体的淋巴细胞毒性抗体)检测。APCA检测采用妻子血清与丈夫淋巴细胞孵育后染色镜检，计数死亡淋巴细胞以定性的方法。

　　1.2.3 免疫治疗

　　采用无菌法，取丈夫静脉血20 mL加入适量肝素钠抗凝，按2∶1的方式取淋巴细胞分离液(美国CEDARLANE)10 mL，将分离液置于试管的下部，将血液置于淋巴细胞分离液的上方，5 000～6 000 r/min离心15 min，排出血清层吸取中间淋巴细胞层液，加生理盐水20 mL混匀，将该液再按上述方法离心、洗涤3次。将淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞移入尼龙毛柱，37 ℃下孵育30 min后，洗去T淋巴细胞，然后挤压洗下B淋巴细胞，无菌生理盐水离心洗涤3次，计细胞数，调整B淋巴细胞数达2～3×107 个/mL，用该液3 mL给患者做皮内注射。取患者前臂内侧为皮内注射区，每侧纵列5个点。每月注射1次，连续3个月，妊娠后再同法免疫治疗3次。如果半年内未孕，则再行3次治疗。课题组人员固定。疗效观察以每次注射后局部反应逐渐缩小为标准，嘱患者妊娠后注意休息,避免妊娠早期性生活频繁,解除精神紧张,并注意观察妊娠早期反应,适当加用维生素E、C等药物。

　　1.2.4 治疗要点

　　①心理治疗。患者往往缺乏用配偶淋巴细胞“主动免疫”保护胎儿的知识，存在不信任感。采用个别谈话及宣传一些有关的知识及材料的方式，向患者说明“主动免疫”的意义、注意事项及方法等，指导患者配合治疗，使患者以乐观的态度配合治疗，取得患者的信任感，以安心接受治疗。②观察措施。每次注射后，要求患者每天测量、记录注射部位红肿硬结范围及持续时间，当反应降低时即允许妊娠，反应不降低即追加注射。主动免疫治疗后要建立良好的护患关系，鼓励孕妇进行开放性沟通，表达内心感受，尤其是对不良情绪的宣泄;分析引起流产的原因，减轻自责和不良情绪;家属及朋友应给予心理支持，共同承担结果。疗效判断标准：妊娠3月B超检查胎儿发育正常为治疗成功的标准。

　　1.3 统计学方法

　　采用SPSS 12.0统计软件,采用非配对t检验;百分率的比较采用χ2检验，P<0.05认为差异有显著性意义。

　　2 结果

　　主动免疫治疗后26例均妊娠,7例妊娠早期再次发生流产,19例经治疗后妊娠维持时间12周以上,治疗成功率为73%。对照组中妊娠维持12周以上5例，治疗成功率为21%。两组比较有显著性差异(P<0.05)。

　　3 讨论

　　随着生殖免疫学的研究进展,认为原发性的习惯性自然流产疾病可能与患者对胚胎、半同种抗原反应性低下、无法产生适当的封闭抗体而致胚胎被排斥、流产有关。并出现了采用患者配偶或无关个体的淋巴细胞等免疫疗法[3]。

　　在正常妊娠中,夫妇HLA抗原不相容,这样胚胎所带的父源性HLA抗原(在于滋养细胞表面)能刺激母体免疫系统,并产生一类IgG型抗体,称之为封闭因子或封闭抗体[4];封闭抗体既可与母体淋巴细胞表面抗原结合,又可与滋养细胞本身结合,从而阻断母儿之间的免疫识别和免疫反应[5]。反复自然流产者常常缺乏封闭抗体,使得免疫系统容易对胚胎产生免疫攻击,最终导致流产。周毅等报道[6],采用配偶静脉血进行淋巴细胞免疫疗法,能使原发性习惯性流产患者CD4细胞及CD4/CD8比例明显上升,IL2活性明显下降,认为这种免疫功能的变化可能通过封闭抗体独特型所介导,有利于促进母体对胚胎的免疫保护,最终有利于妊娠成功[7]。国外自上世纪80年代初开始,对原发性习惯性流产患者采用免疫治疗,免疫原可用配偶或无关个体淋巴细胞、白细胞、单核细胞或绒毛滋养叶细胞膜等,但所用的每次剂量较大、不良反应也多[8]。

　　根据免疫学原理,即小剂量多次异体抗原刺激比大剂量抗原刺激更容易产生保护性抗体,且不良反应也少。我们采用小剂量多次免疫疗法(6次注射/1疗程,每次2×107～3×107/mL淋巴细胞),结合心理治疗，建立良好的医、护、患关系，减轻患者心理负担，极大地提高了治疗效果，值得临床推广。

　　【参考文献】

　　1 Malinowski A, Wilczynski J, Zeman K,et al.Immunological characteristics of nonpregnant women with unexplained recurrent spontaneous abortion who underwent paternal lymphocytes immunization[J]. Zentralbl Gynakol,1998,120(10)：493502.

　　2 Agrawal S, Pandey MK, Pandey A.Prevalence of MLR blocking antibodies before and after immunotherapy[J]. J Henatother Stem Cell Res,2000,9(2)：257262.

　　3 李尚为，黄仲英.原因不明性反复自然流产患者免疫治疗结局的探讨[J].实用妇产科杂志,2001,17(2)：105106.

　　4 余江，张进.封闭抗体在反复自然流产中的作用[J].中华妇产科杂志,2000,35(4):248249.

　　5 陈巧儿，秦卫兵.免疫治疗原因不明习惯性流产后外周血T淋巴细胞亚群的变化[J].实用妇产科杂志,2005,21(2)：2426

　　6 周毅,周敏.反复性自发流产与淋巴细胞主动免疫治疗进展[J].实用妇产科杂志,2003,19(2)：2324.

　　7 Ramhorst R, Agriello E, Zitternman S.Is the paternal mononuclear cells′immunization a successful treatment for recurrent spontaneous abortion[J]? Am J Reprod Immunol,2000,44(3)：129135.

　　8 李恩棠.原因不明习惯性流产免疫治疗的副作用[J].实用妇产科杂志,2001,17(2):105106.