妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘细胞凋亡与围生儿缺氧关系的研究

　　作者：赵亚娟, 宋 鑫 作者单位：郧阳医学院附属太和医院妇产科，湖北 十堰 442000

　　【摘要】 目的：探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘凋亡调节基因表达水平与围生儿缺氧关系。 方法:以30例ICP 患者(ICP组)及27例正常产妇(对照组)为研究对象，应用免疫组化方法测定胎盘上凋亡调节基因bax和bcl-2的表达水平。结果:①ICP组围生儿缺氧的发生率显著高于对照组(43.33%vs.7.41%,P<0.005);②ICP组bax中等以上表达阳性率显著高于对照组(63.33%vs.18.52%,P<0.0005), 而bcl-2的表达水平低于对照组(60%vs.88.89%,P<0.0005);③围生儿缺氧风险有随着bax表达水平升高而增加的趋势(P<0.01)。结论：ICP患者胎盘合体滋养细胞bax基因过度表达，胎盘细胞凋亡率升高，影响胎盘功能，可能是ICP并发围生儿缺氧的病理生理基础之一。

　　【关键词】 妊娠并发症

　　The relationship between the perinatal hypoxia and placental apoptosis-associating gene expression in patients with intrahepatic cholestasis within pregnancy ZHAO Ya-juan, SONG xin (Department of Obstetrics and Gynecology,Taihe Hospital, Yunyang Medical college, Shiyan,Hubei 442000, China)

　　Abstract: Objective To explore the relationship between the expression level of apoptosis gene in placenta and perinatal hypoxia of patients with intrahepatic cholestasis within pregnancy (ICP). Methods Samples were obtained from 30 cases with ICP and 27 normal pregnant women(control group). Bax and bcl-2 level in placenta was detected by immunohistochemistry method. Results ①Perinatal hypoxia rate of ICP group was higher than that of the control group significantly (43.33%vs.7.41%, P<0.005). ②bax expression level in syncytiotrophoblast of ICP group was higher than that of the control(63.33%vs.18.52%,P<0.0005),and bcl-2 expression level was lower than the control(60%vs.88.89%,P<0.0005), both significantly. ③A increasing trend of perinatal hypoxia rate between bax expression level was found in our study(P<0.01). Conclusion One of the possible mechanism involved in perinatal of ICP is apoptosis caused by overexpression of bax in syncytiotrophoblast leading placental dysfunction.

　　Key words： pregnancy complications; cholestasis; apoptosis; bax; bcl-2; placenta

　　妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP)的主要危害是引起胎儿窘迫，新生儿窒息及围生儿死亡率升高[1]，但其机制尚不清楚。有研究认为ICP患者胎盘病理改变与胎儿宫内缺氧有关[2]。胎盘上存在凋亡调节蛋白bax及bcl-2，其表达比例决定细胞的生死存亡。二者比例的改变，可导致胎盘细胞凋亡率改变，影响胎盘功能。本研究拟通过检测ICP患者胎盘bax及bcl-2表达水平，探讨ICP并发围生儿缺氧的可能机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象选自2001年12月至2002年12月在我院住院分娩的ICP患者30例，年龄29.2±4.63(23~39)岁，孕周37.9±1.65(32~41)周。ICP患者诊断标准按曹泽毅主编的《中华妇产科学》[3]中的相关标准。另选同期住院、分娩孕周与年龄相当的正常产妇27例为对照组。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集于胎盘娩出后5 min内，避开明显钙化或梗死区，取胎盘母面中央组织1 cm×1 cm×1 cm，固定、包埋，4 μm连续切片。

　　1.2.2 实验方法 bax及bcl-2基因表达的检测：采用免疫组织化学方法测定两组孕妇胎盘bax及bcl-2基因表达。鼠抗人bax单克隆抗体购自福州迈新公司;兔抗人bcl-2单克隆抗体购自北京中山公司。严格按照试剂盒说明进行。结果判定：用光学显微镜观察，以细胞浆内出现深棕黄色颗粒为阳性，无棕黄色颗粒为阴性，着色细胞数不超过30%为(+)，30%～60%为(++)，超过60%为(+++)。

　　1.3 统计学处理用χ2检验，秩和检验。

　　2 结果

　　2.1 两组围生儿缺氧发生情况 ICP组有2例新生儿窒息，13例胎儿窘迫，其中有2例为脐带缠绕所致，剔除这2例，比较两组围生儿缺氧 (包括胎儿窘迫和新生儿窒息)发生率，发现ICP组围生儿缺氧发生率明显高于对照组(见表1)，χ2=11.45，P<0.005，差异有极显著性。表1 两组围生儿缺氧发生率的比较

　　2.2 两组孕妇胎盘细胞bax及bcl-2基因表达的比较表2 两组胎盘bax及bcl-2表达水平的比较 两组孕妇胎盘均有bax及bcl-2的表达。Bcl-2主要表达于胎盘合体滋养细胞浆内，间质细胞及血管内皮细胞上均未见其表达。bax表达较广泛，合体滋养细胞、间质细胞及血管内皮细胞均有表达，但以合体滋养细胞表达强度最高。另外，bax表达水平高者，bcl-2表达水平较低，二者似呈负相关趋势。由表2可以看出，ICP组bax中度以上表达阳性19例(63.33%)，对照组5例(18.52%)，阳性表达率显著高于对照组(χ2=11.708，P<0.005);而bcl-2中度以上表达阳性18例(60%)，对照组24例(88.89%)，阳性表达率显著低于对照组(χ2=6.116，P<0.025)。进一步对两组资料进行基因表达水平分布的比较，发现ICP组bax高水平表达者居多，其整体表达水平显著高于对照组(秩和检验u=3.559, P<0.0005), 而bcl-2的表达水平显著低于对照组(u=3.461, P<0.0005)。由此推测，ICP组bax/bcl-2的表达比例高于对照组。

　　2.3 bax表达水平与围生儿缺氧的关系按合体滋养细胞上bax基因表达水平不同，将所有观察对象分为3组，bax表达水平为(-)和(+)者为第一组，bax表达水平为(++)、(+++)者分别为第二、三组。比较不同bax表达水平下围生儿缺氧的发生情况如表3所示，bax表达水平越高，发生缺氧的围生儿越多，提示围生儿缺氧的发生率有随bax表达水平升高的趋势。进一步分析发现，围生儿缺氧发生率在前两组之间无显著差异(χ2=0.301，P>0.05)，而第三组分别显著高于前两组(P<0.01)。表3 不同bax表达水平围生儿缺氧发生率的比较

　　3 讨 论

　　3.1 ICP孕妇的胎盘细胞凋亡细胞凋亡是一种普遍存在的生理现象，受凋亡相关基因的调节。bax和bcl-2是一对主要的细胞凋亡调控基因，bcl-2为抗凋亡蛋白而bax为促凋亡蛋白，二者表达比例决定细胞命运。如果bax基因占优势则使细胞对凋亡信号敏感性增强，易于发生细胞凋亡，反之，细胞存活。 正常妊娠各期胎盘细胞内都存在着凋亡调节因子，调节胎盘细胞的凋亡与增殖[4]。王冬梅等[5]证实，胎盘存在着bax和bcl-2基因的表达。我们的研究也得出同样的结果。正常妊娠时，随着妊娠的进展，胎盘细胞凋亡率逐渐增加[6]。细胞凋亡对胎盘的发育、生长及正常妊娠维持具有重要意义。妊娠晚期胎盘滋养细胞凋亡增多，在某种程度上有利于母儿间营养物质交换。但是，当胎盘凋亡增加所致的胎盘损伤超过了其代偿能力时，则出现胎盘功能减退。本研究结果显示，ICP组胎盘合体滋养细胞上bax基因表达阳性率显著高于对照组，而bcl-2基因表达阳性率降低，故bax/bcl-2基因比例升高，细胞凋亡增加，与王冬梅[5]及李红霞等[7]的研究结果一致。绒毛间质细胞及血管内皮细胞上有bax表达而无bcl-2表达，提示这些细胞也易发生凋亡。这与其他作者关于ICP胎盘各种细胞凋亡率升高的报道相一致[5]。

　　3.2 ICP胎盘细胞凋亡与围生儿缺氧的关系合体滋养细胞是胎盘功能的主要承担者，ICP时，其凋亡率升高势必影响胎盘功能。例如胎盘合成分泌雌激素，通过多种机制促进子宫胎盘血流量，胎盘细胞凋亡增多，则其激素合成能力降低，间接影响胎盘血流灌注。虽然，胎盘滋养细胞凋亡增多在某种程度上有利于母儿间营养物质交换，但是，当细胞凋亡所致的胎盘合成分泌功能减退的损害超过了其代偿能力时，则出现胎盘功能减退，影响胎儿宫内安全。bax表达水平升高是细胞凋亡的早期表现。本研究发现，ICP组胎盘合体滋养细胞bax表达水平高于对照组,而bcl-2表达水平低于对照组，可见bax/bcl-2比例其增高，说明ICP组胎盘细胞凋亡的危险高于对照组。提示ICP孕妇胎盘功能减退与胎盘细胞凋亡有密切关系。这与其他作者的研究结果一致[5,7]。ICP组围生儿缺氧的发生率显著高于对照组。进一步分析发现，当bax表达水平增至60%以上时，围生儿缺氧的发生率显著升高，提示ICP围生儿缺氧与bax表达增多有关。这可能是因为bax过度表达引起胎盘细胞凋亡增多,超过其代偿能力，导致胎盘功能减退，从而引起围生儿缺氧。本研究结果提示，bax/bcl-2的表达比例与ICP围生儿缺氧有关，这一比例越高发生围生儿缺氧的危险就越高。因此推测，凋亡调节基因bax及bcl-2的表达比例增高导致的合体滋养细胞凋亡率增加，是ICP胎盘功能减退的病理基础之一。抑制细胞凋亡可能有助于治疗ICP，降低围生儿缺氧发生率。至于ICP时，胎盘凋亡调节蛋白水平改变的原因及机制尚待进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1] Howard PJ, Murphy GM. Bile acid stress in the mother and baby unit[J]. Eur J Gastroenterol Hepatol,2003,15(3):317-321.

　　[2] 肖建平，王海琦，徐昌芬，等.孕鼠肝内胆汁淤积症的胎盘超微结构研究[J]. 江苏大学学报(医学版)，2003，13：193-194.

　　[3] 曹泽毅主编.中华妇产科学(上册)[M]. 北京：人民卫生出版社，1999.503-504.

　　[4] Smith SC, Baker PN, Symonds EM. Placental apoptosis in normal human pregnancy[J]. AM J Gynecol,1997,177(1):57-65.

　　[5] 王冬梅,朱启英,丁 丽,等.妊娠期肝内胆质淤积症胎盘细胞凋亡及调控基因研究[J].中华妇产科杂志,2003,38(1):5-7.

　　[6] De Falco M, De Luca L, Acanfora F, et al. Alteration of the bcl-2:bax ratio in the placenta as pregnancy proceeds[J]. Histochem J,2001,33(7):421-425.

　　[7] 李红霞,冷 静,姚玉宇,等.胎盘细胞凋亡与ICP关系的研究[J].南京医科大学学报,2001，21(4):312-313.