P27蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达

　　作者：毛荣军，李启明，房慧琳，王桂芳 作者单位：广州中医药大学附属佛山中医院病理科，广东佛山528305;广东省佛山市顺德桂洲医院妇产科，广东佛山528305

　　【摘要】 目的 探讨P27蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌发生、发展的关系。方法 采用SP法免疫组化分别检测宫颈鳞状细胞癌、癌旁高级别鳞状上皮病变、癌旁正常鳞状上皮及非癌旁正常鳞状上皮组织中P27蛋白的表达。结果 宫颈鳞状细胞癌、癌旁高级别鳞状上皮病变、癌旁正常鳞状上皮及非癌旁正常鳞状上皮组织中P27阳性表达率分别为35.00%(21/60)、38.89%(14/36)、77.78%(42/54)、80.00%(8/10)，其中宫颈鳞状细胞癌及癌旁高级别鳞状上皮病变P27阳性表达率与癌旁及非癌旁正常宫颈鳞状上皮相比差异均有显著性(P<0.05或0.01)。P27阳性表达率下降与组织学分级、肿瘤大小、肿瘤浸润及淋巴转移有关(P均<0.01)，与年龄无关(P>0.05)。结论 P27在宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程中起重要的作用，体现在P27蛋白表达降低或缺失时易导致宫颈鳞状细胞癌的发生和转移，因此检测P27蛋白表达可作为宫颈鳞状细胞癌的发生、发展及预后评估的一个有用指标。

　　【关键词】 宫颈肿瘤;癌，鳞状细胞;P27蛋白

　　Expression of P27 protein in cervical squamous carcinoma tissues

　　MAO Rong-jun, LI Qi-ming, FANG Hui-lin, WANG Gui-fang

　　1. Department of Pathology, Affiliated Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine,

　　Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Foshan, Guangdong 528305, China;

　　2. Department of Obstetrics and Gynecology, Guizhou Hospital of Shunde Districtin Foshan City, Foshan, Guangdong 528305, China

　　Abstract: Objective To investigate the relationship between the expression of P27 protein and the oncogenesis and development of cervical squamous carcinoma (CSC). Methods The expression of P27 was detected by using SP immunohistochemical staining in paraffin sections from cases of CSC, high-grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) and corresponding normal squamous tissues (CNST) closely adjacent to carcinoma, and other normal squamous tissues (ONST). Results The positive rates of P27 protein expression in SCS, HSIL, CNST and ONST were 35% (21/60), 38.89% (14/36), 77.78% (42/54) and 80% (8/10), respectively. The comparison of positive rates among SCS, HSIL and CNST, ONST showed significant differences (P<0.05 or 0.01). The decreased expression of P27 protein was associated with histologic grading, tumor size, invasion and metastasis of SCS (all P<0.01), and it was not associated with age (P>0.05). Conclusion P27 protein might play an important suppressing role in the genesis and development of CSC, the down-regulated expression of CSC might easily lead to lymphnode metastasis and tumorous invasion, expression of P27 could be helpful in predictin the biological behavior and prognosis of CSC.

　　Key words: cervical neoplasms; carcinoma, squamous cell; P27 protein

　　宫颈鳞状细胞癌是我国女性最常见的恶性肿瘤之一，多种因素长期的共同作用促进了宫颈鳞状细胞癌的发生与发展，在此过程中涉及多基因、多分子水平的改变，其中包括癌基因的激活和抑癌基因的失活，导致了细胞无限制地生长，从而引起肿瘤的发生。在细胞生长过程中，对G1期的调控是细胞周期的关键调控点。P27是细胞周期G1 期重要的负向调控因子，是近年来发现被认为是一种新的候选抑癌基因。目前，它在宫颈鳞状细胞癌中的研究较少，尚无深入研究的文献报道。基于此，我们采用免疫组化法检测了宫颈鳞状细胞癌组织及其癌旁高级别鳞状上皮病变、癌旁正常宫颈鳞状上皮、非癌旁正常鳞状上皮中的P27蛋白，以期为研究宫颈鳞状细胞癌的发生、发展和评估预后提供新的理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 组织标本及处理方法

　　材料选用本院、顺德桂洲医院及广州金域医学检验中心2001年1月～2007年1月手术切除送检的60例宫颈鳞状细胞癌标本，其中36例带有癌旁高级别鳞状上皮病变，54例带有癌旁正常鳞状上皮。60例患者中，年龄29～68岁，平均45岁，所有标本均经病理证实为宫颈鳞状细胞癌，术前均未作放疗和化疗处理。另取10例非癌旁正常宫颈组织的鳞状上皮标本作为对照组。所有标本均经10%中性福尔马林液固定、取材、常规脱水、透明和包埋，连续切片，厚度为5μm。组织切片置于预先涂有多聚赖氨酸的载玻片烤干备用。

　　1.2 免疫组化学染色法

　　采用链菌素亲生物素过氧化物酶法(SP法，按说明进行操作)，以北京中杉公司提供的已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作为空白对照。

　　1.3 结果判断

　　免疫组化染色片，随机选择10个高倍视野，计数1000个肿瘤细胞中阳性细胞百分率，细胞核和(或)胞浆内有棕黄或黄色染色颗粒者为P27蛋白阳性细胞。无棕色或黄色染色颗粒者为P27阴性细胞。阳性细胞>10%定为阳性片，<10%为阴性片。

　　1.4 统计学处理

　　采用χ2检验进行统计学处理。

　　2 结果

　　2.1 P27蛋白在非癌旁正常宫颈鳞状上皮、癌旁正常鳞状上皮、癌旁高级别鳞状上皮病变及宫颈鳞状细胞癌组织中的表达 宫颈鳞状细胞癌中P27阳性表达率低于癌旁及非癌旁正常(P<0.05或0.01)，而与癌旁高级别鳞状上皮病变比较差异无显著性(P>0.05);癌旁高级别鳞状上皮病变P27蛋白阳性表达率与癌旁及非癌旁正常宫颈鳞状上皮差异有显著性(P<0.05或0.01)，见表1。表1 各类宫颈鳞状上皮病变中P27蛋白的表达

　　鳞状上皮病nP27阴性阳性阳性率、(略)

　　2.2 P27蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理因素的关系

　　60例宫颈鳞状细胞癌患者中，年龄≤45岁与>45岁P27蛋白阳性表达率比较差异无显著性(P>0.05);肿瘤直径≤3cm与>3cm P27蛋白阳性表达率比较差异有高度显著性(P<0.01);无宫颈外组织浸润与有宫颈外浸润P27蛋白阳性表达率比较差异有高度显著性(P<0.01);在病理组织分级中，宫颈鳞状细胞癌Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅲ级P27蛋白阳性表达率比较差异有高度显著性(P<0.01);无淋巴结转移与有淋巴结转移P27蛋白阳性表达率比较差异有高度显著性(P<0.01)，见表2。表2 宫颈鳞状细胞癌的临床病理因素与P27蛋白的表达项目nP27阴性阳性阳性率(略)

　　3 讨论

　　Polyak等[1]在1994年最先发现了P27，它是一个分子量为27kDa的热稳定蛋白质，人的P27-cDNA，长约594bp ，编码198个氨基酸的蛋白质，其主要功能是作为CDK抑制因子参与细胞周期的调控，对细胞周期的调控要作用在G1/S期，对靶分子的作用发生于细胞核内。P27在胞浆内的异常定位可导致P27失活及降解增加[2]。由于P27在细胞周期中起负性调控因子的作用，因此被认为是一种抑癌基因，具有抑制肿瘤发生、发展的特性。但是，有关P27在人类肿瘤的大量研究中却发现P27基因的缺失、突变与重排在人类肿瘤细胞中是罕见现象，P27蛋白水平的调节主要发生于转录后的翻译和降解过程[3]，其与肿瘤的关系主要体现在其蛋白水平及活性上。有些研究发现[4～6]，P27蛋白在皮肤黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌的表达水平是反映肿瘤侵袭性的标志，其表达的减少与预后不良关系密切，但尚有研究报道[7]，在膀胱尿路上皮癌中随着组织学分级的增加，P27蛋白表达明显增高。本实验研究发现，P27在非癌旁及癌旁正常宫颈鳞状上皮中的阳性表达率分别为80.00%(8/10)及77.78%(42/54)，而在癌旁高级别鳞状上皮病变及鳞状细胞癌组织中P27蛋白阳性表达率为38.89%(14/36)及35.00%(21/60)，宫颈鳞状细胞癌中P27阳性表达率明显低于癌旁及非癌旁正常宫颈鳞状上皮组织，差异具有显著性(P<0.05或0.01)，而与癌旁高级别鳞状上皮病变比较，差异无显著性(P>0.05)。癌旁高级别鳞状上皮病变P27蛋白阳性表达率与癌旁及非癌旁正常宫颈鳞状上皮差异亦有显著性(P<0.05或0.01)，显示了P27蛋白表达水平的下降与宫颈鳞状细胞癌的发生、发展有关，提示P27在宫颈鳞状细胞癌的发生中起重要作用。由此可推出，P27蛋白的表达越少，P27蛋白功能越受到抑制，由此可能破坏其负调控细胞周期的功能，导致细胞周期失调，S期细胞增多，DNA合成相应增多，从而细胞过度增生，阻止细胞凋亡，导致细胞无限增殖和肿瘤形成。

　　本实验还发现，P27蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌的肿瘤大小、临床病理分级、宫颈外浸润及淋巴结转移等有关(P均<0.01)，而与年龄无关(P>0.05)，提示P27蛋白表达降低的宫颈鳞状细胞癌更易使肿瘤快速生长及发生宫颈外浸润和淋巴结转移。因此可认为，P27高表达是宫颈鳞状细胞癌预后良好的一个独立指标，其原因可能为P27的低表达，对G1/S期转换的抑制作用减弱，使细胞更易进入S期;低水平的P27使G0期细胞恢复进入细胞周期;P27表达能影响细胞间接触，下调P27能抑制细胞粘附从而促进肿瘤细胞扩散。

　　综上所述，P27蛋白与宫颈鳞状细胞癌的发生、发展有着密切关系，可成为一个预测术后复发的指标。P27基因的发现为研究肿瘤的发生、发展、诊断治疗及预后评估等提供了一个新的热点，但是P27的作用机理尚未彻底清楚。因此，深入研究P27基因对宫颈鳞状细胞癌的发生机制、发展过程及其防治都具有重要意义。

　　【参考文献】

　　Polyak K, Lee MH, Erdjument-Bromage H,et al. Cloning of P27,a cyclin-dependent kinase inhibitor and a protential mediator of extracellular autimitogenic signals [J].Cell,1994,78:59-66.

　　Liang J, Zubovitz J, Petrocelli T, et al. PKBP Akt phosphorylates P27, impairs nuclear import of p27 and opposes p27 mediated G1 arrest [J]. Nat Med,2002,8(10):1153-1160.

　　Nakayama KI, Hatakeyama S, Nakayama K. Regulatiou of the cell cycle at the G1-Stransition by proteolysis of cyclinE and P27 Kipl [J]. Bioche in BiophysRes Commun,2001,282(4):853-860.

　　Sanki A, Li W, Colman M, et al.Reduced expression of p16 and p27 is correlated with tumour progression in cutaneous melanoma [J]. Pathology,2007,39(6):551-557.

　　Kouvaraki MA, Korapati AL, Rassidakis GZ, et al. Potential role of Jun activation domain-binding protein 1 as a negative regulator of p27kip1 in pancreatic adenocarcinoma [J]. Cancer Res,2006,66(17):8581-8589.

　　Sasaki T, Katayose Y, Yamamoto K, et al. Adenovirus Expressing Mutant p27(kip1) Enhanced Apoptosis and Inhibited the Growth of Xenografted Human Breast Cancer [J]. Surg Today,2007,37(12):1073-1082.

　　Fu TY, Tu MS, Tseng HH, et al. Overexpression of p27 kip1 in urinary bladder urothelial carcinoma [J]. Int J Urol,2007,14(12):1084-1087.