芦荟治疗对子宫内膜癌survivin表达的影响

　　作者：王祥珍　李英勇　孙显斌 作者单位：广东医学院附属医院妇产科，广东湛江 524001

　　【摘要】目的：探讨芦荟治疗对子宫内膜癌中凋亡相关基因survivin表达的影响。方法：应用芦荟治疗子宫内膜癌患者35例，采用免疫组化(SP)法检测治疗前后癌组织中survivin的表达水平。结果：芦荟治疗前后子宫内膜癌组织survivin的阳性表达率及表达强度分别为71.4%、(19.36±4.78)和25.7%、(13.35±2.93)，治疗后子宫内膜癌survivin阳性表达率及表达强度显著降低(P<0.01)。子宫内膜癌组织中survivin表达强度与组织学分级、手术分期、肿瘤大小均呈正相关(r=0.412，0.398，0.408，P均<0.05)。结论：芦荟治疗子宫内膜癌的作用可能与其抑制癌组织survivin的表达有关。

　　【关键词】 子宫内膜肿瘤; 芦荟; 基因; survivin; 凋亡

　　Effect of Aloe on survivin expression in endometrial carcinoma

　　WANG Xiangzheng, LI Yingyong, SUN Xianbin

　　Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhangjiang 524001, China

　　【Abstract】Objective: To study the influence of Aloe on survivin expression in endometrial carcinoma. Methods: Thirtyfive patients with endometrial carcinoma were treated with oral Aloe. Survivin expression in tumor tissue was detected by immunohistochemical method before and after treatment. Results: Survivin expression rate and intensity were significantly lower after treatment than those before treatment [25.7% vs 71.4%, P<0.01; (13.35 ± 2.93) vs (19.36 ± 4.78), P<0.01]. The expression intensity of survivin was positively correlated with the histological grade, clinical stage and tumor size in endometrial carcinoma (P<0.05). Conclusion: The mechanism of Aloe action may be related to the inhibition of survivin expression in endometrial carcinoma.

　　【Key words】 endometrial neoplasm; Aloe; gene; survivin; apoptosis

　　芦荟是一种具有广泛生物活性的多年生常绿草本植物。大量研究证明，芦荟具有良好的抗肿瘤功能[1]，且毒副作用很小，所以芦荟的开发与研究已成为医药界重点课题之一。survivin是新发现的凋亡抑制基因，能抑制细胞凋亡，又可以调节有丝分裂，与肿瘤的发生机制、化疗及预后密切相关[2]。本研究应用芦荟治疗子宫内膜癌，观察其对子宫内膜癌survivin表达的影响，旨在探讨芦荟治疗子宫内膜癌的作用机制。

　　1 资料与方法

　　1.1 研究对象

　　2004年3月至2005年3月我院收治并经病理确诊的子宫内膜癌35例，平均年龄55.6岁。按FIGO手术病理分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期9例，Ⅲ期8例，Ⅳ期2例;病理类型：35例均为子宫内膜样腺癌，其中G112例，G215例，G38例。35例均于芦荟治疗前行诊断性刮宫取内膜组织，治疗后手术切除子宫，取内膜标本。所有标本均分2份，1份做组织病理明确诊断，1份做survivin蛋白检测，标本常规石蜡切片制成4μm。

　　1.2 治疗方法

　　凡疑子宫内膜癌患者诊刮后，即取中华芦荟研成细末冲服，4.5g/d(文献推荐剂量[3])，11～13　d后行手术治疗，平均用药12　d。

　　1.3 研究方法

　　(1)采用免疫组化(SP)法检测用药前后子宫内膜癌组织survivin表达水平的变化，一抗survivin单抗人多克隆抗体及SP试剂合均购自福州迈新生物技术有限公司，实验步骤按试剂盒说明书进行，用PBS代替一抗作为空白对照。(2)图像分析： 采用图像分析系统将各标本片选取5个完整而不重复的视野，测定并计算平均灰度值(MC)及survivin的表达强度(阳性面积/测定面积×MC)。

　　1.4 结果判定

　　在组织切片中显示细胞浆染色淡黄至棕黄色者为阳性细胞，将阳性细胞按其数量及显色强度分为3级：表达弱阳性(+)，即阳性细胞数<10%，显色强度为淡黄或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色;表达强阳性()，即阳性细胞数>60%，多数细胞呈黄棕色染色;表达中度阳性()，即阳性细胞数及显色强度介于弱阳性与强阳性之间;凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。

　　1.5 统计学处理

　　采用χ2检验、t检验及相关分析。

　　2 结果

　　2.1 子宫内膜癌组织中survivin基因的表达

　　survivin基因表达阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞浆和细胞膜上，为粗细不一的棕黄色颗粒，见图1。

　　芦荟治疗前后子宫内膜癌组织survivin阳性表达率分别为71.4%和25.7%，治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.01);而且芦荟治疗后survivin的灰度值比治疗前明显降低(P<0.01)，见表1。表1 芦荟治疗前后子宫内膜癌中survivin的表达水平(略)

　　2.2 survivin表达与子宫内膜癌临床病理因素的关系

　　子宫内膜癌组织中survivin表达强度与组织学分级、手术分期、肿瘤大小均呈正相关(r=0.412，0.398，0.408，P均<0.05);且治疗后子宫内膜癌组织中survivin表达强度明显下降(P均<0.01)，见表2。表2 子宫内膜癌组织survivin的表达与临床病理的关系(略)

　　3 讨论

　　近年来对芦荟的化学成分、药理作用及机制研究很多，前期研究发现，芦荟的多种有效成分具有调节机体免疫功能、抗感染、抗衰老、抗放射损伤、降压、降血糖等多种积极作用。芦荟的多糖类成份抗肿瘤作用明确，同时还具有较好的化疗增效和减毒作用[4]。本研究对芦荟治疗子宫内膜癌的抗癌机制进行探讨。

　　survivin基因是一种凋亡抑制基因，可通过促进细胞周期依赖激酶(CDK)释放P21抑制凋亡[5];还可通过阻断半脱氨酸蛋白酶Caspase3和Caspase7调节通路抑制凋亡[6]。在正常人的组织中几乎不能检测到survivin的表达。近年的许多学者发现，survivin几乎所有肿瘤中均有表达[7]。本实验中子宫内膜癌组织survivin基因表达阳性率为71.4%。什么因素导致了survivin基因在肿瘤中的再活化尚不清楚。细胞生长及凋亡途径紊乱有利于肿瘤的生长和侵袭，子宫内膜癌中survivin基因的异常表达，抑制了细胞凋亡，在子宫内膜癌的发病中起一定作用。在对子宫内膜癌患者临床资料的分析时发现，临床分期愈晚、组织分级恶性度越高、肿瘤越大，survivin基因表达强度愈强，说明survivin的基因的表达预示肿瘤有较高的侵袭性，与文献报道结果一致[8]。

　　本研究检测了芦荟治疗前后survivin基因在子宫内膜癌中表达的变化，结果表明，芦荟治疗后子宫内膜癌survivin阳性表达率明显降低(P<0.01)，提示芦荟可通过抑制survivin在子宫内膜癌中的阳性表达，诱导癌细胞凋亡，从而抑制细胞的异常增殖和恶性转化而发挥抗癌作用。本研究结果还表明，芦荟治疗后子宫内膜癌survivin表达强度显著下降(P<0.01)，提示芦荟可能是通过降低survivin在子宫内膜癌中的表达强度， 阻断survivin的抗凋亡作用，降低肿瘤的侵袭性，抑制肿瘤的生长，从而发挥抗癌功能。

　　芦荟是一种天然的药物，具有较好的应用前景，值得临床推广应用，其抗肿瘤的确切机理有待进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1]ZOU X, JI C F, GAO S Y. Study on comparison on antitumor effects of three kinds of aloe polysccharide [J]. Harbin Univ CommerceNat Sci Edit，2004，20(1)：1417.

　　[2]TAKAI N, MIYAZAKI T, NISHIDA M, et al. Expression of survivin is associated with malignant potential in epithelial ovarian tumors [J].Int J Mol Med,2002,10(2):2112163

　　[3]张民庆，龚惠明. 抗肿瘤中药的临床应用[M] . 北京：人民卫生出版社，1998：5960.

　　[4]王勇，王余伟，黄非胜. 芦荟多糖对肿瘤化疗的增效和减毒作用研究[J]. 中药新药与临床药理，2002，13(2)：89.

　　[5]HAY B A. Understanding IAP function and regulation: a view from drosphila [J]. Cell Death, 2000, 7:10451056.

　　[6]HARFOUCHE R, HASSESSIAN H M, GUO Y, et al. Mechanisms which mediate the antiapoptotic effects of angiopoietin1 on endothelial cells [J]. Microvase Res, 2002, 64(1):135147.

　　[7]AMBROSINI G, ADIDA C, ALTIERI D C. A novel antiapoptosis gene, surviving, expressed in cancer and lymphoma [J]. Nat Med, 1997, 3(8):917921.

　　[8]TAKAI N, MIYAZAKI T, NISHIDA M, et al. Survivin expression correlates with clinical stage, histological grade, invasive behavior and survival rate in endometrial carcinoma [J]. Cancer Lett, 2002, 184(1):105116.