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靶向表皮生长因子受体shRNA表达载体的构建和鉴定

发表时间：2010-06-17 浏览次数：640次

引用：

关键词：

表皮生长因子受体;RNA干扰;短发卡状RNA;转染

作者：

王慧，魏志平

作者单位：

出版年份：

期刊页数：

收录者：

知网,万方

摘要：

目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)质粒表达载体并进行鉴定。方法 ①根据人类EGFR的mRNA序列，设计4条干扰片段，以PGPU6/GFP/Neo质粒为载体，构建shRNA重组体，转化入DH5a大肠杆菌，提取质粒，进行酶切和测序鉴定;②采用脂质体Lipofectamin 2000分别转染人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞，用G418筛选阳性克隆。结果 ①经酶切及测序鉴定，成功构建了针对 EGFR的4个重组干扰质粒;②成功转染Colo-16细胞，经筛选后得到稳定表达

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